ДНК на Chlamydia pneumoniae

Главна информация

Хламидията е малък вътреклетъчно свързващ прокариотен паразит (0,2-1µm), който има и двете бактериални характеристики (синтезира РНК и ДНК, има стена и клетъчна мембрана, подобна на Грам-отрицателни бактерии, чувствителен е към антибиотици от циклинов тип) и вирус (умножава се само в живите еукариотни клетки, не може да синтезира АТФ, който се осигурява от клетките гостоприемници).

Той обаче се различава от всички микроорганизми по конкретния цикъл на растеж, характеризиращ се с 2 различни форми:
• елементарният корпускул (ЕК), адаптиран към екстрацелуларното съществуване;
• мрежеста корпускула (CR), адаптирана към вътреклетъчната среда (интрацитоплазматична).

Елементарните корпускули са много инфекциозни и след като попаднат в тялото, те се прикрепват към клетъчната мембрана, като се ендоцитират. Вътреклетъчно ендозомата не се слива с лизозомите, както обикновено се случва с всеки вътрешен материал, като хламидиите остават във фагоцитирания везикул през целия си жизнен цикъл. Малко след влизане в клетката, ЕС се трансформира в CR, който е по-голям, не може да зарази други клетки и разделя двоично във вакуолите („интрацитоплазмени хламидиални включвания“). След около 36 часа CR се реорганизира в CE, така че след 48-72 часа цялата цитоплазма на клетката може да бъде заменена с включвания, съдържащи стотици/хиляди CE. Въпреки че цитоплазмата на клетката е заета почти изцяло от ЕК, клетъчната функция е минимално засегната. Освобождаването на елементарни корпускули може да стане чрез екзоцитоза на включвания или чрез лизис на клетки гостоприемници. ЕК са в състояние да инфектират нови клетки или в същия организъм, или в нов гостоприемник. По този начин жизненият цикъл на C. pneumoniae е разделен между елементарните корпускули, които са в състояние да заразят нови гостоприемници, но не могат да се възпроизвеждат, и мрежестите корпускули, които се възпроизвеждат, но не са в състояние да причинят нова инфекция.

Последните класификации разделят хламидиите на 4 семейства, от които най-важното в човешката патология е семейството. Chlamydiaceae, която съдържа два рода:
• род Chlamydia - най-важният представител е C. trachomatis;
• род Chlamydophila - C. pneumoniae, C. psittaci, C. pecorum, C. abortus и др.

Пневмонията и бронхитът са най-честите заболявания, свързани с C. pneumoniae. В поредица от клинични изпитвания 10% от случаите на пневмония и приблизително 5% от случаите на бронхит и синузит при възрастни се дължат на микроорганизма.

Симптомите на инфекция с C. pneumoniae не се различават от другите причини за пневмония и включват запушване на носа, кашлица, треска и диспнея. Повечето случаи на пневмония са относително леки и не изискват хоспитализация. Въпреки това, дори в леки случаи, пълното възстановяване е бавно, въпреки адекватната антибиотична терапия и кашлицата и неразположението могат да продължат няколко седмици след началото на заболяването.

Няколко хронични заболявания също са свързани с инфекция с C. pneumoniae. Пациентите с анамнеза за респираторни инфекции с C. pneumoniae са по-склонни да развият астматичен бронхит, което предполага, че тези микроорганизми могат да бъдат важен фактор за развитието на астма или обостряния на астмата.

Културните техники за изолиране на микроорганизма са трудоемки и отнемат много време; Молекулярното тестване е бърз начин за откриване на ДНК за C. pneumoniae в различни дихателни секрети, като по този начин се улеснява ранното установяване на подходяща антибиотична терапия. В скорошно проучване при деца с респираторни инфекции чувствителността и специфичността на PCR теста към диагнозата остра инфекция са съответно 63,6% и 100%.

Препоръки за определяне на хламидия - ДНК - откриване на белодробни инфекции.

Обучение на пациента - не е нужно.

Събран образец - а) фарингеален или назофарингеален ексудат; б) течност, получена чрез бронхиален лаваж или бронхо-алвеоларен лаваж, трахеална или бронхиална аспирация, храчки.

Контейнер за прибиране на реколтата - а) сух буфер (без транспортна среда); б) стерилен контейнер.

Количество реколта - б) минимум 2 мл.

Необходима е обработка след прибиране на реколтата - не е нужно.

Причини за отхвърляне на доказателствата - недостатъчно количество за анализ; замърсяване на пробата; прекалено стари екземпляри.

Тествайте стабилността - пробите са стабилни 48 часа при 2-4 ° C преди екстракцията на нуклеинови киселини.

Метод и интерпретация на резултатите

Метод - PCR Light-Cycler в реално време: верижна полимеризационна реакция с откриване в реално време на натрупания PCR продукт, чрез измерване на излъчената флуоресценция (качествен тест).

Референтни стойности - Хламидия - неоткриваема ДНК.

Граница на откриване - 200 деца/мл.

Тълкуване на резултатите

Откриване на хламидия - ДНК в дихателните секрети предполага клинична диагноза на инфекция с Chlamydia pneumoniae.

Граници и смущения

Въпреки че PCR е метод, който осигурява бърза и надеждна диагноза, фалшиво отрицателни резултати могат да се получат в проби, които съдържат много малко микроорганизми.